BMP-2调控EMT促进伴微钙化乳腺癌转移的机制研究pdf博鱼体育- 博鱼体育官方网站- 最新网址

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　　目的钼靶X线上微钙化表现，经常是提示肿瘤恶性的征象，然而具体机制不详。骨形态发生蛋白BONEMORPHOGENETICPROTEINS,BMPS是TGFΒ超家族的重要成员之一，可促进骨、软骨生成，调控细胞增殖和分化，及调节多种脏器生长发育。有研究发现BMPS与异位钙化密切相关，且BMP2在多种肿瘤有异常表达。本文旨在研究BMP2在伴微钙化乳腺癌中的表达及与临床病理学特征、预后之间的关系，探究其对乳腺癌的影响及调控机制。方法1收集天津医科大学肿瘤医院529例伴微钙化病例，分析微钙化与患者临床病理学特征及预后的关系。并从中选取100例患者，切蜡块进行免疫组化分析，了解其中BMP2、RUNX2、OPN的表达情况，分析BMP2与预后的关系。2体外实验验证BMP2与乳腺癌细胞生物学行为的关系。选出低表达BMP2的细胞系MCF7，以及高表达BMP2的细胞系MBAMD231，分别通过加RHBMP2刺激BMP2表达，以及加入BMP2抑制剂NOGGIN来抑制BMP2的表达，应用MTT检测BMP2对肿瘤细胞增殖的影响，应用平板克隆实验检测BMP2对细胞克隆形成能力的影响，应用流式细胞术检测BMP2对细胞凋亡的影响，应用划痕试验和TRANSWELL实验检测BMP2对侵袭迁徙能力的影响。3我们对BMP2调控乳腺癌细胞侵袭转移的机制进行研究，首先利用REALTIMEPCR和WESTERNBLOT等技术分析细胞系中BMP2与EMT相关指标的关系，发现其调控EMT的可能，为探究其调控EMT的可能机制，我们应用REALTIMEPCR和WESTERNBLOT等技术在乳腺癌细胞系验证BMP2与PI3K/AKT通路相关蛋白的关系。以及加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002后，BMP2对EMT的调控是否受到抑制来进一步验证其可能的作用通路。4建乳腺癌移植瘤模型，观察BMP2对移植瘤的生长、转移等情况的影响，并应用REALTIMEPCR技术和免疫组化方法检测移植瘤中EMT相关蛋白表达的变化。结果1伴微钙化乳腺癌患者肿瘤较大、淋巴结转移率较高，并且无进展生存相对较差，伴微钙化为影响预后的独立因素之一。在伴微钙化乳腺癌组织中，BMP2、RUNX2、OPN表达明显增高，提示三者可能参与微钙化形成，异位骨形成可能为微钙化形成的机制之一。BMP2高表达与患者无进展生存明显相关，为独立预后因素之一。2外源性RHBMP2可促进人乳腺癌细胞MCF7中BMP2的表达。而BMP2抑制剂NOGGIN可以抑制MBAMD231细胞中BMP2表达。体外实验结果显示，RHBMP2可促进乳腺癌细胞增殖、克隆形成以及迁移侵袭能力，并且可使凋亡能力下降。而NOGGIN可抑制BMP2的作用，从而抑制肿瘤增殖、克隆形成，抑制乳腺癌细胞侵袭迁移能力，并且可以促进凋亡。提示BMP2可促进乳腺癌细胞恶性程度。3在乳腺癌MCF7细胞中，BMP2的表达与EMT一些指标显著相关。随着BMP2浓度增加，上皮表型ECADHERIN、CX43表达显著下调，而间质表型NCADHERIN、FN、VIMENTINMRNA表达水平显著上调。BMP2可促进PI3K/AKT信号通路PPI3K、PAKT和PMTOR表达，进而调控EMT进程。而加入此信号通路抑制剂LY294002后，PPI3K、PAKT、PMTOR未出现明显的上调，EMT相关指标无明显改变，BMP2调控EMT的作用明显减弱。可见BMP2可以通过激活PI3K/AKT信号通路促进MCF7细胞发生EMT，从而诱导肿瘤侵袭转移。4应用经BMP2处理过的乳腺癌MCF7细胞成功建立BMP2高表达移植瘤模型。BMP2组移植瘤增长速度明显快于对照组。BMP2组出现淋巴结转移以及骨转移的比例明显大于对照组。与对照组相比，BMP2组ECADHERIN表达减弱，VIMENTIN表达增强，提示出现EMT现象。体内实验进一步验证BMP2可促进EMT进程，调控乳腺肿瘤转移。结论1乳腺癌伴微钙化这一特征与肿瘤恶性度密切相关。2BMP2高表达于伴微钙化乳腺癌中，且与转移密切相关，是预后不良的指标。3经BMP2刺激后乳腺癌增殖转移能力增强，恶性度提高。4BMP2可诱导PI3K/AKT通路关键蛋白磷酸化，调控EMT相关指标变化，诱导EMT进程，从而促进肿瘤转移。5体内实验证实BMP2可促进肿瘤增长以及肿瘤转移，可能作为控制乳腺癌生长转移的新靶点。